關(guān)于Tn5轉(zhuǎn)座酶的原理介紹

　　RNA測序（RNA-Seq）是基于二代測序技術(shù)開展轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究過程中廣泛使用的一種方法，能夠在特定時(shí)間點(diǎn)對生物樣本中的多種RNA進(jìn)行定性和定量分析。針對RNA測序的常規(guī)建庫方法都需要先將RNA轉(zhuǎn)換為雙鏈DNA，且需經(jīng)過目標(biāo)RNA富集及片段化、雙鏈DNA合成、接頭連接、PCR擴(kuò)增等多個(gè)步驟。

　　Tn5轉(zhuǎn)座酶復(fù)合體因能一步打斷雙鏈DNA并且使DNA兩端帶上接頭，而廣泛應(yīng)用于二代測序建庫等領(lǐng)域。近期也有研究發(fā)現(xiàn)，Tn5轉(zhuǎn)座酶同樣能以類似的方式作用于RNA/DNA雜合鏈，從而能夠省去傳統(tǒng)RNA建庫技術(shù)中的RNA片段化、二鏈合成等繁瑣的操作步驟，進(jìn)一步拓展了Tn5轉(zhuǎn)座酶的新用途。此外，Tn5轉(zhuǎn)座酶也被廣泛用于體外轉(zhuǎn)基因(外源基因整合到宿主細(xì)胞)等各領(lǐng)域。

　　執(zhí)行轉(zhuǎn)座功能的酶，通常由轉(zhuǎn)座子編碼，識(shí)別轉(zhuǎn)座子兩端的特異序列，能把轉(zhuǎn)座子從相鄰序列中脫離出來，再插入到新的DNA靶位點(diǎn)，無同源性要求。

　　EZ-Tn5™轉(zhuǎn)座酶具有較高的Tn5轉(zhuǎn)座活性。是高純度，單亞基的酶，可隨機(jī)插入EZ-Tn5至任何靶向DNA，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)插入DNA克隆的量為>106，當(dāng)用EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子在沒有鎂離子孵育時(shí)，形成穩(wěn)定的EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子復(fù)合體，特定的認(rèn)識(shí)自然發(fā)生的Tn5和微小的Tn5轉(zhuǎn)座反應(yīng)和使EZ-Tn5轉(zhuǎn)座子具有高活性的端端序列。