DAP-SEQ體外蛋白表達(dá)載體構(gòu)建protocol

在表觀遺傳學(xué)研究中，尋找轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控位點(diǎn)是困擾科學(xué)家的難題，經(jīng)典的ChIP-seq技術(shù)存在很多弊端，最主要的是抗體問(wèn)題，對(duì)于非模式植物更難入手。與ChIP-seq相比，DAP-seq將蛋白質(zhì)體外表達(dá)技術(shù)與高通量測(cè)序技術(shù)相結(jié)合，不需要針對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)錄因子制備特異性抗體，所以DAP-seq具有快速、高通量、節(jié)約時(shí)間成本等顯著優(yōu)勢(shì)。

DAP-seq是研究非模式植物順?lè)唇M和表觀組的有力技術(shù)，大大擴(kuò)展和加深了科學(xué)家們研究的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)信息。它能夠捕獲全部轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)，因此能獲得完整的密碼本。并且，DAP-seq無(wú)需復(fù)雜和專(zhuān)門(mén)的實(shí)驗(yàn)設(shè)備，這種方法可用于所有模式或非模式植物。這為我們提供了一扇窗口，來(lái)發(fā)現(xiàn)調(diào)控序列中表觀遺傳變異影響植物性狀的機(jī)制。

DAP-seq實(shí)驗(yàn)流程：

構(gòu)建體外蛋白表達(dá)載體→體外蛋白表達(dá)→DNA文庫(kù)構(gòu)建→親和純化→上機(jī)測(cè)序